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使用ImageJ定量Western Blot教程 免费下载

时间:2020-02-23    点击: 次    来源:网络    作者:佚名 - 小 + 大

Western Blot的结果可以通过比较不同泳道中的谱带进行视觉评估。但是,有时这些差异可能很细微,因此应使用更定量的方法。

ImageJ是基于Java的图像分析软件包,被科学家广泛用于量化视觉结果,例如凝胶或显微照片上的条带。从美国国立卫生研究院(NIH)免费下载本附录将带您了解如何在图像分析中使用ImageJ的基础知识。

选择要分析的区域

从桌面或程序菜单中打开ImageJ。从“文件”菜单中,打开您从Chemidoc系统获得的PCNA印迹的图像文件。

使用“矩形选择”工具选择第一个波段周围的矩形区域。所选区域的高度应约为其宽度的两倍,并应与印迹上最宽的条带一样宽。

图像

按“ CTRL”“ 1”将其标记为第一个频段。选择框应为黄色,蓝色框内带有数字“ 1”,表示它是选择的第一个波段。

使用ImageJ图2

移动鼠标光标,使其位于框边框之一上方,并变为箭头。拖动框,使其位于下一个波段,然后按“ CTRL”“ 2”以选择下一个波段。

使用ImageJ图3

对每个频段重复此步骤,对每个后续频段按“ CTRL”“ 2”。每次选择时,每个选择框中都会出现一个蓝色小方框,指示频段编号(在我们的示例中为1-7)。

使用ImageJ图4

选择了所有频段之后,按“ CTRL”“ 3”。这将弹出另一个图像,该图像显示指示每个波段强度的直方图(直方图越大,波段越亮)。每个波段都应有一个直方图–您可能需要选择“拖动”按钮并将图像向下拖动才能看到所有波段。

使用ImageJ图5

从第一个波段的直方图开始,选择“绘制线”按钮,并在直方图的顶部绘制一条直线,从该位置开始它开始急剧下降,直到再次趋于平稳。

使用ImageJ图6

选择“魔术棒”按钮,然后在直方图内的任意位置单击。所选区域应以黄色勾勒出轮廓,并会出现一个名为“结果”的新窗口,该窗口以数值形式指示条带的强度–条带越亮,数字越大。

使用ImageJ图7

对每个直方图重复此过程。对于代表频段的每个直方图,您应该最终获得一个数值。完成后,在“结果”窗口中选择“文件”,然后将值另存为电子表格。然后可以将这些值复制到“ Blots Quant”电子表格中进行分析和比较。

使用ImageJ图8


您需要对具有图像的任何其他印迹进行此分析。

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