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SDS-PAGE相关溶液的配方

时间:2018-01-12    点击: 次    来源:网络    作者:佚名 - 小 + 大

SDS-PAGE相关溶液的配方(10%过硫酸铵、5×电泳缓冲液、5×上样缓冲液)

10%(W/V, g/ml)过硫酸铵(APs)的配制:(1 ml)

1. 称取0.1 g过硫酸铵;
2. 加入1 ml的去离子水,将固体粉末彻底溶解;
3. 贮存于4℃。

注意:10%过硫酸铵最好现配现用,配好的溶液在4℃保存可使用2周左右,过期会失去催化效果。

5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制:(1 L)

1. 称取Tris粉末15.1 g、Glycine(甘氨酸)94 g、SDS 5.0 g;
2. 加入约800 ml的去离子水,搅拌溶解;
3. 加去离子水定容至1 L,室温保存。

注意:加水时应让水延着壁缓缓流下,以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。

5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制(方案一):(5 ml)

(本方案摘自Takara网站)

组分:Tris-HCl  pH6.8(250 mM);SDS (10%);溴酚兰(0.5%);甘油(50%);β-巯基乙醇(5%)
配制过程:

1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 1.25 ml;甘油2.5 ml;称取SDS固体粉末0.5 g;溴酚兰25 mg;
2. 加入去离子水溶解后定容至5 ml;
3. 小份(500 μl)分装后,于室温保存。
4. 使用前将25 μl的β-巯基乙醇加入到每小份中去。
5. 加入β-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。

5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制(方案二):(10 ml)

(本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明)

组分:Tris-HCl  pH6.8(60 mM);SDS (2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);β-巯基乙醇(14.4 mM)

配制过程:

1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 0.6 ml;50%的甘油5 ml;10%的SDS溶液2 ml;1%的溴酚兰1 ml;
2. 加入去离子水定容至10 ml;
3. 分装;
4. 在4℃可保存数周,-20℃可保存数月之久。

以上两种上样Buffer的配方不太一样,你还可以参考下面这个配方

2×SDS凝胶加样缓冲液  组分(摘自《分子克隆》第三版)

Tris-HCl  pH6.8(100 mM);SDS (4%);溴酚兰(0.2%);甘油(20%);β-巯基乙醇或二硫苏糖醇(200 mM)

不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。β-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。

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